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第十,吸取卵黄抗体时,应先除去封口上的石蜡,再用酒精棉球擦净瓶塞,然后把消毒过的针头插入,用注射器吸取家禽卵黄抗体。吸取卵黄抗体的针头要固定,一次不能吸完时,不要把针头拔出,而应用酒精棉球包裹,以便继续吸取,不能用给家禽注射过的针头吸取家禽卵黄抗体,以免交叉污染。
第十一,选择合适的注射部位。给患病家禽注射卵黄抗体时,应选择胸部肌内注射,卵黄抗体含有大量的卵磷蛋白和脂肪,注射到家禽体内后吸收较为困难,因此以胸部肌内深部注射最为合适。注射时将注射针头(20~23号针头)呈30°至45°倾斜的角度,于胸部1/3处(应尽量靠近肩窝,远离腹部),朝背部方向刺入胸肌(切忌垂直刺入胸肌),这样既不会刺穿胸腔伤及内脏,又可避免垫料污染针口和注射部位。注射幼龄家禽时,要浅部肌内注射;注射中、大家禽时,注射深度以0。5厘米为宜。
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(一)制备用鸡只的选择与管理()
选择健康的SP F蛋鸡,隔离饲养观察1周后无特殊反应者,可进行免疫接种。
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(二)免疫原的选择、免疫程序和卵黄抗体的采集()
1。 免疫原的选择
实践证明,选择具有良好反应原性和免疫原性的抗原,是制备优质抗血清的基础。而制备优良抗原的关键是选择优良的菌(毒)株,所以应挑选形态、生化特性、血清学与抗原性、毒力等具有典型性的菌(毒)株作为抗原制造用毒株。
通常使用组织灭活苗。选择40~50日龄SP F鸡,用通过SP F鸡传代的野毒滴鼻、点眼,每只鸡接种0。2~0。3毫升,在48~72小时死亡的鸡,无菌采集其法氏囊,并进行病变观察,将病变典型的法氏囊低温保存备用。取10克病料加100毫升0。5%甲醛生理盐水,匀浆、冻融、过滤,滤液加8%甘油,置于37℃条件下灭活18~24小时,即为水剂灭活苗,也可加白油等佐剂,制成油乳剂灭活苗。制备好的疫苗要进行无菌检验,取灭活苗0。5毫升接种于普通琼脂斜面及厌氧肉汤培养基各1支,于37℃培养48小时,应无菌生长。此外,要先进行安全试验及保护试验,经无菌检验合格的灭活苗,给40~50日龄SP F鸡或未经相应疫苗免疫过的健康鸡,肌内注射、滴鼻或点眼,接种0。3~0。5毫升,观察半个月,无发病者可用1 ∶ 10强毒0。5毫升/只攻毒,观察10~14天,无发病者为安全有效。
2。 免疫程序
首次免疫,每只肌内注射1毫升,经7~10天后进行第二次免疫,每只2毫升,二免7天后,用琼脂扩散方法测定卵黄抗体效价,如已达到1 ∶ 64以上,即可收集高免蛋,如效价不高,可隔7~10天进行第三次加强免疫。
3。 卵黄抗体的采集
高免蛋用0。1%新洁尔灭溶液浸泡5分钟,洗涤干净,放入无菌室晾干备用。无菌操作,打破蛋壳,分离蛋黄。收集的蛋黄置于无菌的组织匀浆器中,加等量灭菌生理盐水,每毫升加入青霉素、链霉素各1 000单位,硫柳汞0。01%,匀浆、过滤,分装于消毒瓶内,4℃冷藏备用。
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(三)卵黄抗体的检验()
卵黄抗体的检验包括无菌检验、安全检验、中和试验和抗体效价测定等项目。
1。 无菌检验
取0。5毫升高免卵黄抗体,分别接种于普通琼脂斜面和厌氧肉肝汤培养基,37℃培养24~48 小时,应无细菌生长。
2。 安全检验
取30日龄健康鸡10只,每只肌内注射卵黄抗体2毫升,观察5~7天,应无任何不良反应。
3。 中和试验
取30日龄健康鸡20只,随机分成2组。试验组每只皮下或肌内注射野毒和卵黄抗体(1 ∶ 10)混合液1毫升,观察饲养10~15天,应全部存活,对照组每只皮下或肌内注射野毒1毫升,观察10~15天,应部分或全部死亡,剖检后出现典型病变。
用琼脂扩散试验测定抗体效价,抗体效价在1 ∶ 64 以上为合格。
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(四)卵黄抗体的纯化()
目前,卵黄抗体产品根据应用目的不同可分为精制和粗制两级产品。口服可以使用粗制产品如卵黄液或卵黄粉,注射则需要精制产品,而用于免疫学检验则要求更高。精制卵黄抗体是选择无特定病原体蛋鸡经免疫后,由所产高免蛋精制成的卵黄抗体。
精制就是将蛋黄中的免疫球蛋白进行分离纯化的过程。卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪,其比例为1 ∶ 2。大部分蛋白质都是脂蛋白,存在于卵黄颗粒中,不溶于水,只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的,而卵黄抗体是γ卵黄球蛋白。因此,卵黄抗体的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类,从水溶性蛋白中分离卵黄抗体。多年来,已建立了许多较为高效而经济的方法,这些方法主要有聚乙二醇法、硫酸葡聚糖沉淀法、天然胶(如藻酸钠、角叉聚糖)或乙醇沉淀法、水稀释法、酸化法、高速离心法、超滤法等,可将蛋黄中的免疫球蛋白进行有效地分离纯化。
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(一)精制卵黄抗体Ⅲ型(禽流感、传染性支气管炎二联卵黄抗体)()
【制备方法】 本品系采用禽流感病毒、传染性支气管炎病毒浓缩精制抗原免疫健康蛋鸡,收集鸡蛋,分离卵黄,结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术,经浓缩精制和冷冻干燥制成的卵黄抗体。
【物理性状】 本品为微黄色晶体状冻干粉,遇水可快速溶解。
【作用与用途】 本品主要作用于禽流感病毒H9型、H5型以及H5型变异毒株和传染性支气管炎病毒等急、慢性病毒。
【用法与用量】 肌内注射,每2克本品用200毫升生理盐水或黄芪多糖注射液稀释,雏禽每只注射0。5毫升,成禽每只注射1毫升,重症者酌情加量。若有大肠杆菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【免疫保护期】 免疫保护期为14天左右。
【贮存与有效期】 密封、避光、干燥保存,有效期为2年。
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(二)传染性法氏囊病和新城疫二联抗体冻干粉()
【制备方法】 本品系采用传染性法氏囊病毒、新城疫病毒浓缩精制抗原免疫健康蛋鸡,收集鸡蛋,分离卵黄,用水稀释法结合硫酸铵盐析法,在保证抗体生化结构完整和生物活性良好存在的前提下,彻底去除垂直传播病原,结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术,浓缩精制的IgY,后经冷冻干燥而成。含抗法氏囊病、新城疫抗体和2%盐酸多西环素。卵黄抗体琼脂扩散试验效价大于1 ∶ 32,血凝抑制效价大于11log2。
【物理性状】 本品为亮黄色晶体粉状,遇水可迅速溶解。
【作用与用途】 用于传染性法氏囊病及新城疫的预防与治疗,尤其对各种强毒和超强毒株引起的重度感染和后期衰竭有非常独特的疗效。
【用法与用量】 肌内注射,每2克本品用200毫升生理盐水或黄芪多糖注射液稀释,可用于治疗患传染性法氏囊病的病鸡200羽,预防时可用于400羽。或治疗患新城疫病鸡200羽,预防时可用于400羽,病情严重者需遵兽医加量。若有细菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮藏与有效期】 密封后在4℃~8℃条件下冷藏保存,有效期为2年。也可于阴凉、干燥处常温保存,有效期为24个月。
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(三)精制卵黄抗体冻干粉Ⅱ型(鸭病毒性肝炎卵黄抗体)()
【制备方法】 本品系鸭病毒性肝炎的卵黄抗体经过浓缩提纯、外源性病菌灭活处理所得的精制抗体粉,具有效价高、安全性高、稳定性强的特点。每支本品不低于36个抗体效价。
【物理性状】 微黄色粉状,遇水可快速溶解。
【作用与用途】 主治各种强毒和超强毒株引起的鸭肝炎,特别对病毒性疾病的重度感染、后期衰竭有非常独特的疗效。
【用法与用量】 肌内注射,每2克本品用200毫升生理盐水或黄芪多糖注射液稀释,可用于治疗雏鸭400羽,成鸭200羽。病情严重需遵兽医加量。若有大肠杆菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮存与有效期】 在4℃~8℃条件下冷藏保存,有效期为24个月。
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(四)精制卵黄抗体冻干粉(小鹅瘟、鹅副黏病毒病二联卵黄抗体)()
【制备方法】 本品系为高效价小鹅瘟、鹅副黏病毒病的卵黄抗体经过浓缩提纯、外源性病菌灭活处理所得的精制多联血清抗体粉,具有效价高、安全性高、稳定性强的特点。
【物理性状】 微黄色粉状,遇水可快速溶解。
【作用与用途】 本品主要针对小鹅瘟和鹅副黏病毒病有特效。
【用法与用量】 每2克本品用200毫升生理盐水稀释,用于注射成鹅250羽或雏鹅500羽。病重时可适当增加用药量,预防量减半。
【注意事项】 ①本品为直接作用于病毒类药物,注射时偶有应激反应发生,如出现应激情况,可紧急注射抗应激类的药物以缓解。②本品宜现配现用,12小时内用完。
【贮存与有效期】 密封、避光保存,有效期为24个月。
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(五)鹅毒清(小鹅瘟、鹅副黏病毒病、鹅流感三联卵黄抗体)()
【制备方法】 本品系为高效价小鹅瘟、鹅副黏病毒病及鹅流感的卵黄抗体经过浓缩提纯、外源性病菌灭活处理所得的精制多联血清抗体粉,具有效价高、安全性高、稳定性强的特点。
【物理性状】 微黄色粉状,遇水可快速溶解。
【作用与用途】 本品主要对小鹅瘟、鹅副黏病毒病、鹅流感3种病毒性疾病有特效。
【用法与用量】 每克本品用100毫升生理盐水稀释,用于注射成鹅100羽,雏鹅200羽。病重时可遵医嘱适当增加用药量,预防量减半。
【注意事项】 ①本品为直接作用于病毒类药物,注射时偶有应激反应发生,如出现应激情况,可紧急注射抗应激类的药物以缓解。②本品宜现配现用,12小时内用完。
【贮存与有效期】 密封、避光保存,有效期为24个月。
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(六)传染性法氏囊病卵黄抗体()
【制备方法】 本品系为高效价传染性法氏囊病毒的卵黄抗体经过浓缩提纯、外源性病菌灭活处理后,冷冻真空干燥制成,具有效价高、安全性高、稳定性强的特点。本品每支不低于36个抗体效价。
【物理性状】 本品为白色或淡黄色冻干粉,遇水可快速溶解。
【作用与用途】 主治各种强毒和超强毒株引起的传染性法氏囊病,特别对重度感染和后期衰竭有非常独特的疗效。
【用法与用量】 肌内注射,每2克本品用200毫升生理盐水或黄芪多糖注射液稀释,可用于治疗雏鸡400羽,成鸡200羽。病情严重需遵兽医加量。若有大肠杆菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮存与有效期】 密封、避光保存,有效期为24个月。
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(七)精制包被卵黄抗体()
【制备方法】 本品用大豆卵磷脂包被禽流感、新城疫、传染性支气管炎免疫球蛋白,从而彻底解决免疫球蛋白口服难吸收的问题,避免免疫球蛋白被胃液破坏。卵磷脂包被还能使免疫球蛋白病毒丧失侵染性,直接抑制病毒在机体内的扩散和增殖。同时,清除蛋白形成磷脂层,更易被肠道组织吸收。抗禽流感H9N2抗体(IgY)血凝抑制效价大于11log2,抗禽流感H5N1抗体(IgY)血凝抑制效价大于9log2。
【物理性状】 本品为黄色或微黄色液体。
【作用与用途】 用于禽流感、传染性支气管炎和新城疫等病早、中期感染的紧急治疗与紧急预防。注射、饮水后3~6小时即能被机体完全吸收进入血液,能够快速发挥疗效,中和病毒,终止病原对机体的危害,缓解症状,恢复健康。可以增加机体的抗体储备,主动抵御病原侵入。对病毒作用快,抗体持续时间长。
【用法与用量】 注射时,可用于成鸡、成鸭1 000 羽,雏鸡2 000羽,预防时剂量减半,重症时剂量加倍;饮水时使用注射剂量的倍量。
【注意事项】 本品与适量抗生素联合应用,效果更佳。
【贮藏与有效期】 阴凉、干燥、冷藏保存。常温下可保存,有效期为24个月。
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(八)抗鸭浆膜炎卵黄抗体()
【制备方法】 本品采用鸭传染性浆膜炎(RA)浓缩精制抗原免疫健康蛋鸭,收集鸭蛋,分离卵黄,结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术,制成浓缩精制的卵黄抗体,后经